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Sexaje de embriones en ovino mediante PCR específica y PCR‑duplex


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Autores: J.H. Calvo, A. Martínez-Royo, P. Sánchez, J.L. Alabart, J. Folch
Volumen: 102-4 (354-359)
Tipo de Artículo: Producción Animal
Palabras Clave: sexaje, ovino, PCR, MOET
Resumen:

Dentro del esquema de mejora por prolificidad puesto en marcha por la UPRA- Carnes Oviaragón desde 1994, se contempla que la producción de los machos a testar se realice a través de un programa MOET. Con el objetivo de aumentar la eficiencia y la rentabilidad del MOET, se planteó poner a punto el sexaje de los embriones previamente a su transferencia. El sexaje de embriones se realizó mediante amplificación específica por PCR de un fragmento de ADN del cromosoma Y (SRY gene; GenBank Acc. Z30265). Mediante cebadores específicos diseñados en este locus, se amplifica un fragmento de 166 pares de bases en las muestras procedentes de animales o de embriones machos, mientras que en las muestras procedentes de hembras no se produce amplificación, al carecer las mismas de este locus. Igualmente, y con el fin de incrementar la seguridad de la técnica, y evitar la aparición de falsos negativos, se ha llevado a cabo la puesta a punto de una PCR duplex. Esta PCR consiste en una doble amplificación de dos fragmentos de ADN mediante PCR, uno del gen CGN (GenBank Acc. AY785290), gen estructural que se amplifica tanto en machos como en hembras, y por otra parte el fragmento específico de ADN del cromosoma Y (SRY gene). Los estudios de sensibilidad a partir de ADN genómico extraído de sangre mostraron un límite mínimo de detección de 20 pg de ADN, mientras que en ensayos con diferente número de células procedentes de una biopsia de embriones se encontró que se puede sexar un embrión a partir de dos células.

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BASES DE DATOS Y REPOSITORIOS

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